結(jié)核病的分子實驗檢測技術(shù)有哪些?
結(jié)核病是一種病因明確、治有辦法的疾病。它一年四季均可發(fā)病,15~35歲的人群是該病的高發(fā)人群,其潛伏期為4~8周,其中80%發(fā)生在肺部,其他部位也可繼發(fā)感染。
該病主要經(jīng)呼吸道傳播,傳染源是接觸排菌的肺結(jié)核患者??菇Y(jié)核藥物具有殺菌、滅菌或抑菌作用,通過化療直接進行抗菌治療效果顯著。
但是,結(jié)核病的診斷較為困難。現(xiàn)在,我們可以利用多種實驗室診斷技術(shù)來診斷結(jié)核病,提高結(jié)核病診斷的特異性和敏感性。
其中,分子生物學檢測技術(shù)是近年來廣泛應(yīng)用的一種技術(shù)。目前,多種分子生物學檢測方法正在研發(fā)和評估之中,其敏感性較高,診斷快速,越來越受到廣大臨床醫(yī)生的青睞。
分子實驗檢測的聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)
聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)可以將標本中微量的結(jié)核桿菌DNA(脫氧核糖核酸)加以擴增。一般情況下,顯微鏡檢查僅能檢測到104~105條菌/毫升,而PCR技術(shù)可檢測出1~100飛克的結(jié)核桿菌的DNA,相當于1~20條菌/毫升。
但是,在DNA提取過程中容易遭遇到污染等技術(shù)原因,從而導致檢驗結(jié)果出現(xiàn)假陽性。此外,PCR技術(shù)無法區(qū)分死菌和活菌。
因此,PCR技術(shù)不能作為結(jié)核桿菌治療效果的評估依據(jù),以及用于流行病學調(diào)查等。
目前,我們在采用PCR技術(shù)的同時,可以對結(jié)核桿菌耐藥相關(guān)基因(如與利福平耐藥相關(guān)的rpoB基因、與異煙肼耐藥相關(guān)的katG基因等)進行檢測。
分子藥物敏感試驗,也是應(yīng)用PCR技術(shù)進行檢測的,這是對耐藥位點突變的一種檢測方法。它包括直接測序、高分辨率溶解曲線分析、線性探針雜交、基因芯片檢測技術(shù),以及新近在國際上廣泛應(yīng)用的半巢式實時多聚酶鏈式反應(yīng)技術(shù)等。
其中,全自動封閉操作的半巢式實時多聚酶鏈式反應(yīng)技術(shù)檢測方便,除了可以鑒定結(jié)核桿菌之外,還能檢測利福平耐藥的分子標記,被世界衛(wèi)生組織推薦應(yīng)用于臨床治療前的快速分子藥物敏感性檢測與菌種的鑒定。
線性探針雜交方法與基因芯片檢測技術(shù)比較煩瑣,但是能對一線和二線的抗結(jié)核藥物敏感性進行快速檢測,并且能夠應(yīng)用在非結(jié)核桿菌的菌種鑒定上面。
半巢式實時多聚酶鏈式反應(yīng)技術(shù)
全自動封閉操作的半巢式實時多聚酶鏈式反應(yīng)(XpertMTB/RIF)技術(shù)是一種自動化的、以實時定量PCR擴增為基礎(chǔ)的方法,以rpoB基因為靶基因,檢測標本中是否含有結(jié)核桿菌以及利福平是否耐藥。整個檢測過程大約需要2小時,并且具有良好的生物安全性和操作簡便性。
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